關鍵詞： 小鼠明暗穿箱實驗

目的：本操作規(guī)程是關于利用小鼠明暗穿箱實驗對受試物的抗焦慮活性進行藥理學評價的具體操作規(guī)程。

背景知識：無

原理：動物置于明箱中央，背朝隔板。暗箱紅燈不通電，明箱白熾燈照明。造成動物焦慮。

主體內容（操作步驟）：

實驗的準備

實驗的器材、儀器、藥品

儀器：分析天平，攝像儀，錄像機，監(jiān)視器，小鼠明暗箱（為一個上面敞開的箱子(45cm×27cm×27cm,上海欣軟信息科技有限公司提供),內部分為明箱和暗箱，明箱占箱子的3/5，暗箱占2/5，有一個高出箱壁20cm的隔板分開，隔板的底部開一個7.5cm×7.5cm的方口。明箱內涂成白色，由一個60W的白紙燈泡照明，燈泡高出箱子17cm.暗箱內涂成黑色，上方17cm置一個不通電的紅色燈泡。箱子底部劃上邊長9cm的方格。）。

器材：紅燈（25W），白熾燈（60W）秒表。 

藥品：受試藥、陽性對照藥。

實驗動物

使用昆明種小鼠，雄性，體重范圍在18~22g之間。飼養(yǎng)于12h一個循環(huán)的反向明暗轉換的環(huán)境中（7am關燈）10d。實驗開始前5-7d每天撫摸動物1-2min，減少無關刺激對實驗的影響。對一般體征進行觀察，選用健康狀況良好的動物供實驗使用。

溶媒的配制

根據(jù)受試物的性質選擇適當溶媒，配制后在容器標簽上記錄名稱、使用期限、配制日期、配制人。

受試物及陽性對照物的配制

實驗當日給藥前將受試物及陽性對照物用溶媒充分溶解或混懸，根據(jù)給藥劑量及給藥容積配制成所需濃度的均勻的溶液或混懸液。

陰性對照物

原則上以配制受試物及陽性對照物時使用的溶媒作為陰性對照物。

實驗操作規(guī)程（附加資料I）

1 分組 將小鼠稱重后記錄體重，按體重隨機分組，每組10只。

2 給藥 經口給藥,給藥容積為0.1-0.2ml/10g，各組實驗動物的測試呈正反交替順序進行，記錄給藥時間。

3 致焦慮 給藥適當時間后，將小鼠置于明箱中央，背朝隔板。實驗于10am至2pm安靜環(huán)境下進行，暗箱紅燈不通電，明箱白熾燈照明。每只小鼠測試后迷路用濕海綿徹底清洗并擦干。

4 記錄實驗過程 通過明暗箱上方的攝像機及與隔壁房間相連的監(jiān)視器和錄像機觀察和記錄5min內小鼠的活動情況。

5 數(shù)據(jù)讀取 由不知情的熟練實驗人員觀看實驗錄像帶，分別記錄小鼠穿箱次數(shù)、在明箱停留的時間及總穿格次數(shù)。

結果判定

1 穿箱次數(shù)

穿箱次數(shù)以平均值?標準差表示。

2 明箱停留時間

明箱停留時間以平均值?標準差表示。

3 總穿格次數(shù)

總穿格次數(shù)以平均值±標準差表示。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

在對照組和給藥組之間以穿箱次數(shù)、明箱停留的時間及總穿格次數(shù)分別進行Student’s t檢驗，判斷給藥后有無顯著性差異。

參考文獻（附加資料II）Nicholas M. Barnes, Celine H.K.Cheng, et al: Prpfiles of interaction of R(+)/S(-)-zacopride and anxiolytic agents in a mouse model. European Journal of Pharcology,218(1992):91-100

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