【摘要】 目的 通過觀察蒙醫(yī)溫針對**模型大鼠自主活動的影響及對****鈉致睡眠時間的影響,探討蒙醫(yī)溫針的改善睡眠作用。方法 ①選用****鈉誘導(dǎo)睡眠的法,取健康雄性 SD 大鼠 30 只,分為空白對照組和蒙醫(yī)溫針組,每組 15只,以****鈉致眠時間為觀察指標(biāo)。②采用對氯苯丙氨酸致**大鼠模型,取健康雄性 SD 大鼠 60 只,分為空白對照組、**模型組、蒙醫(yī)溫針組和***注射液組,每組 15 只,觀察大鼠的自主活動和一般情況。結(jié)果 蒙醫(yī)溫針組****鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。蒙醫(yī)溫針組****鈉致眠大鼠睡眠時間與空白對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。**模型組、蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠造模前體重較空白對照組減輕(均 P＜0.01)。**模型組大鼠**后體重與空白對照組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠體重增加,與空白對照組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。**模型組大鼠活動時間明顯高于空白對照組(P＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠活動時間明顯低于**模型組(均 P＜0.05)。**模型組大鼠站立次數(shù)明顯高于空白對照組(P＜0.05),蒙醫(yī)溫針組和***組大鼠站立次數(shù)明顯低于**模型組(P＜0.05,P＜0.01)。結(jié)論 蒙醫(yī)溫針對大鼠有**作用和改善睡眠功能作用。
【關(guān)鍵詞】 針灸療法;蒙醫(yī);睡眠;自主活動;大鼠;**模型
**是睡眠的發(fā)生或維持障礙,影響日常生活的一類病癥,屬蒙醫(yī)“赫依”病范疇。西醫(yī)**本病仍存在難以根治、不同程度地產(chǎn)生**反應(yīng)、耐藥性和依賴性等問題。通過文獻(xiàn)記載和近年來的臨床觀察發(fā)現(xiàn),蒙醫(yī)溫針對**癥的療效顯著,同時具有無毒副反應(yīng)、**可靠等特點(diǎn),其*大優(yōu)勢在于可以避免口服**所致的副反應(yīng)。因此,尋找適當(dāng)有效的針刺干預(yù)措施是臨床與實驗研究的重要課題之一。本實驗采用****鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠的方法,觀察蒙醫(yī)溫針對 SD 大鼠睡眠的影響,并選用對氯苯丙氨酸致**大鼠模型,采用曠場試驗(OFT 試驗),觀察**大鼠的自主活動和一般情況,探討蒙醫(yī)溫針改善睡眠的作用,現(xiàn)報告如下。蒙醫(yī)溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響
 
1 材料與方法
1.1 實驗動物
健康雄性SPF級SD大鼠80只,體重(180±220)g,由中國人民解放軍**醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供[許可證號 SCXK-(軍)2007-004]。
1.2 主要儀器與試劑
電子天平(BS124S,賽多利斯提供);MLY-Ⅰ型蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀(內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院蒙醫(yī)藥學(xué)院研制,**號ZL201120058078.0);特制蒙醫(yī)銀針(0.5 mm×30 mm,內(nèi)蒙古元陽中蒙醫(yī)科技開發(fā)有限責(zé)任公司提供);自發(fā)活動視頻分析系統(tǒng)(上海欣軟信息科技有限公司提供);****鈉、對氯苯丙氨酸由 sigma 提供;***注射液(2 mL:10 mg)由西安利君沙制藥有限責(zé)任公司提供(國藥準(zhǔn)字 H61022214)。
2 方法
2.1 蒙醫(yī)溫針對****鈉致眠大鼠睡眠時間的影響
2.1.1 實驗分組及處理方法
取大鼠 30 只,隨機(jī)分為空白對照組和蒙醫(yī)溫針組,每組 15 只。隨機(jī)分組標(biāo)號后,在室溫 18℃～28℃、相對濕度 40%～50%的條件下飼養(yǎng)。蒙醫(yī)溫針組根據(jù)蒙醫(yī)經(jīng)典理論和臨床**有效穴取頂會穴、赫依穴、心穴,每次取 1 個穴位。頂會穴位于兩眉正中線與兩耳葉上緣連線在頭頂上的交叉處;赫依穴位于第 1 胸椎上凹正中;心穴位于第 7 胸椎下凹正中。將大鼠固定后,用特制銀針斜刺,再接蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀,電流強(qiáng)度為 100 mA,溫度為 40℃,留針 15 min。每日上午 8:00-11:00 進(jìn)行**,共** 7 d。空白對照組每日同蒙醫(yī)溫針組相同方法固定 1 次,每次 15 min,連續(xù) 7 d。蒙醫(yī)溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響
2.1.2 觀察指標(biāo)
兩組**結(jié)束后給予腹腔注射****鈉(45 mg/kg),觀察兩組大鼠翻正反射消失和恢復(fù)時間,以翻正反射消失至恢復(fù)的時間為睡眠持續(xù)時間,開始記錄給藥時間、翻正反射消失時間和翻正反射恢復(fù)時間,睡眠以翻正反射消失為指標(biāo)。分別計算出睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時間。記錄大鼠腹腔注射****鈉后至翻正反射消失時間為睡眠潛伏期,翻正反射消失至大鼠覺醒的時間為睡眠持續(xù)時間。
2.2 蒙醫(yī)溫針對**模型大鼠自主活動的影響
2.2.1 造模方法
將 PCPA(300 mg/kg)用弱堿性生理鹽水(pH 值為7～8)配置成混懸液備用。**模型組、蒙醫(yī)溫針**組和***注射液組大鼠在實驗前 2 d 每日早晨 8:00開始,按1 mL/100 g 用量腹腔注射 PCPA 混懸液,每日1次,連續(xù)注射 2 d。第 1 次腹腔注射PCPA 混懸液 28～30 h 后,大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失,活動明顯頻繁,白天也活動不停,興奮性增高,攻擊性增強(qiáng),飲食及二便顯著增多,鼠毛蓬亂無光澤,大便色灰白,整體觀察與對照組明顯不同,表明**模型成功。
2.2.2 實驗分組及處理方法
取正常雄性 SD 大鼠 60 只,隨機(jī)分為空白對照組、**模型組、蒙醫(yī)溫針**組和***注射組,每組 15 只,正常飼養(yǎng) 7 d 后予以相應(yīng)處理。①空白對照組不造模,于實驗前連續(xù) 2 d 腹腔注射同 PCPA 用量體積的弱堿性生理鹽水,第 3 天開始實驗,與蒙醫(yī)溫針組同樣方法固定 15 min,連續(xù) 7 d,其他處理同蒙醫(yī)溫針組。②**模型組造模 2 d,第 3 天開始實驗,與蒙醫(yī)溫針組同樣方法固定 15 min,連續(xù) 7 d,其他處理同蒙
醫(yī)溫針組。③蒙醫(yī)溫針組造模 2 d,第 3 天開始蒙醫(yī)溫針**,連續(xù) 7 d,針刺方法同實驗 1。④***注射液組實驗前2 d造模,第3天開始大鼠腹腔注射***注射液,0.92 mg/kg/d,每日 1 次,連續(xù) 7 d。
2.2.3 曠場試驗
參照文獻(xiàn)方法采用曠場試驗方法,于**第7天(第 1 次腹腔注射 PCPA 后 7 d),在安靜、暗光條件下檢測。實驗前先置大鼠 1 次單獨(dú)放入 OFT-100 自發(fā)活動實驗儀(箱子長寬均為 80 cm,高為 40 cm,為內(nèi)空的立柱體,壁周為透明玻璃)中適應(yīng)3 min后,操作者握住大鼠尾根部 1/3 處,輕輕將大鼠放入礦場箱中格內(nèi),開始同步錄像計時。觀察 5 min 內(nèi)大鼠活動情況。取出大鼠后,用毛巾蘸清水及低濃度酒精徹底擦拭箱底,避免留有氣味而干擾下 1 只大鼠的觀察結(jié)果。
2.3 觀察指標(biāo)
①中央格停留時間(s),即自大鼠被放入正中格至其有 3 爪跨離該格的時間;②站立次數(shù),即兩前肢向上抬起離開箱底面或攀伏在側(cè)壁上,以后腿支撐使身體豎立的次數(shù);③水平活動時間(s),即水平面上活動的時間。蒙醫(yī)溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響
2.4 統(tǒng)計學(xué)方法
所有數(shù)據(jù)采用 SPSS16.0 軟件統(tǒng)計處理,采用兩個獨(dú)立樣本的 t 檢驗和卡方檢驗,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,以 P＜0.05 表示差異統(tǒng)計學(xué)意義。
3 結(jié)果
3.1 蒙醫(yī)溫針對****鈉致眠大鼠睡眠時間的影響
由表 1 可見,蒙醫(yī)溫針組****鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞·474· Shanghai JAcu-mox, May 2014, Vol 33, No 50.05)。蒙醫(yī)溫針組****鈉致眠大鼠睡眠時間與空白對照組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01),提示蒙醫(yī)溫針明顯延長****鈉誘導(dǎo)的睡眠時間。
3.2 蒙醫(yī)溫針對**模型大鼠自主活動的影響
空白對照組大鼠睡眠、飲食等方面無明顯改變。**模型組、蒙醫(yī)溫針組及***注射液組大鼠于第 1 次腹腔注射 PCPA 混懸液 28～30 h 后,晝夜節(jié)律消失,白天活動增多,飲水進(jìn)食減少;隨**時間的延長,大鼠疲憊、煩躁、皮毛蓬亂無澤愈加明顯,對聲音、光等刺激的警覺性減弱,飲食及二便增多,攻擊性增強(qiáng)。整體觀察與對照組明顯不同,與文獻(xiàn)報道一致,表明模型復(fù)制成功。至造模第 8 天,即實驗當(dāng)天**模型組大鼠仍存在上述行為改變。蒙醫(yī)溫針組和***組大鼠在予以針刺刺激和***注射后,表現(xiàn)為安靜、活動減少等現(xiàn)象,睡眠時間、飲水進(jìn)食、精神狀態(tài)等均逐漸恢復(fù)。
3.2.1 4 組大鼠不同時間點(diǎn)體重比較
入組時各組大鼠體重?zé)o明顯差異(P=0.202,F=1.595)。造模前,各組大鼠體重?zé)o明顯差異(P=0.701,F=0.474)。各組大鼠**前體重間有顯著性差異(P=0.000,F=11.156),**模型組、蒙醫(yī)溫針組和***注射液組較空白對照組減輕(均 P＜0.01)。**后,**模型組大鼠體重與空白對照組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠體重增加,與空白對照組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠體重與空白對照組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
3.2.2 4 組大鼠曠場實驗水平活動和垂直活動參數(shù)比較
由表 3 可見,在水平活動上,**模型組大鼠活動時間明顯高于空白對照組大鼠(P＜0.01),**模型組大鼠在中央格停留時間有增高的趨勢,但與空白對照組大鼠比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠活動時間明顯低于**模型組大鼠(均 P＜0.05)。在垂直活動上,**模型組大鼠站立次數(shù)明顯高于空白對照組大鼠(P＜0.05),蒙醫(yī)溫針組和***組大鼠站立次數(shù)明顯低于**模型組大
鼠(P＜0.05,P＜0.01)。
4 討論
**癥屬蒙醫(yī)“身、心、語”功能紊亂而引起人體“三根”平衡失調(diào)而導(dǎo)致的“赫依”病。**的關(guān)鍵在于調(diào)節(jié)“三根”平衡,疏通筋脈,促使機(jī)體歸于“三根七素”相對平衡狀態(tài),恢復(fù)正常生理功能。蒙醫(yī)溫針是集針刺效應(yīng)、溫?zé)嵝?yīng)以及穴位特異性刺激為一體,通過抑制“赫依”,平衡“三根”的作用達(dá)到****的目的。頂會穴、赫依穴、心穴是臨床用于****癥的主要穴位。頂會穴具有**、調(diào)神之功效,對**“赫依”性喑啞、神志不清、癲狂、視力減退、頭暈、**等起主要作用;赫依穴對**癲狂、心悸、激蕩、婭結(jié)、夜不能寐、舌苔灰白、頸項強(qiáng)直等赫依性**起主要作用;心穴位對**心悸、心抖、癲狂、巴達(dá)干赫依性心病、**、譫妄、納呆、神志昏迷等起主要
作用。蒙醫(yī)溫針療法是一種行之有效的****的方法。本實驗中用到的蒙醫(yī)溫針儀是結(jié)合現(xiàn)代電子技術(shù)研制而成,可以達(dá)到傳統(tǒng)蒙醫(yī)溫針的作用,且具有操作簡便、溫度可調(diào),**等特點(diǎn)。睡眠時間是評測睡眠質(zhì)量的重要指標(biāo)。****鈉為一種**神經(jīng)抑制藥,低劑量時主要抑制腦干網(wǎng)狀上行激活系統(tǒng),大劑量則對**神經(jīng)系統(tǒng)起廣泛抑制,從而出現(xiàn)**、催眠、麻醉作用,故在一定閾劑量下可致大鼠睡眠。因此選用****鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠是被廣泛采用的**催眠實驗基礎(chǔ)指標(biāo)。在于觀察蒙醫(yī)溫針與****鈉的協(xié)同作用。以往文獻(xiàn)對****鈉劑量的報道不一,且大鼠自身對****鈉的敏感性也存在差異。因此,前期實驗先對****鈉的閾劑量進(jìn)行了摸索,結(jié)果致大鼠全部睡眠的****鈉閾劑量值為 45 mg/kg。本實驗結(jié)果顯示,蒙醫(yī)溫針與****鈉有協(xié)同作用,可延長****鈉誘導(dǎo)大鼠睡眠的時間(P＜0.01),提示蒙醫(yī)溫針具有**催眠的作用。行為是機(jī)體的重要功能表現(xiàn)之一,動物的行為是在神經(jīng)、***系統(tǒng)和運(yùn)動器官的共同協(xié)調(diào)作用下形成的,其中以神經(jīng)調(diào)節(jié)為主。對行為學(xué)進(jìn)行評估時神經(jīng)、***等研究領(lǐng)域的重要組成部分。目前行為學(xué)評價方法有很多種,如觀測大鼠的一般情況、探究行為、情緒反應(yīng)、體力情況等。本實驗采用曠場實驗來評價**大鼠模型的行為學(xué)變化。曠場實驗是評價實驗動物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。本實驗在**模型大鼠造模過程中,從大鼠一般行為觀察發(fā)現(xiàn),**后的大鼠飲食、能量消耗增加,體重下降。大鼠表現(xiàn)倦怠、體毛蓬亂、無光澤。在行為上,長時間**后的大鼠興奮性提高,探究行為和攻擊性增強(qiáng),對環(huán)境刺激的警覺性和攻擊性行為增加。至實驗當(dāng)天時(**次腹腔注射 PCPA 后 7 d),**模型組大鼠仍存在上述行為異常。蒙醫(yī)溫針組和***注射液組大鼠在予以針刺刺激和***注射后,睡眠時間、精神狀態(tài)、飲水進(jìn)食、體重等均逐漸恢復(fù)。曠場實驗的參數(shù)一般有水平運(yùn)動參數(shù)、垂直運(yùn)動參數(shù)和中央格停留時間。水平運(yùn)動參數(shù)有跑動的距離、速度、時間等,這些參數(shù)反映動物的活動度;垂直活動指的是動物的站立、攀壁、修飾等行為,反映動物對新鮮環(huán)境的好奇程度。在曠場實驗中大鼠增加在中央格停留時間,減少外周格時間,顯示更少的焦慮樣行
為。本實驗結(jié)果顯示,**模型組大鼠在曠場中央格停留時間高于空白對照組,顯示出**模型組比空白對照組減少了焦慮樣行為;**模型組大鼠活動時間和站立次數(shù)明顯高于空白對照組(P＜0.01,P＜0.05),顯示模型組的探索性行為增強(qiáng)。蒙醫(yī)溫針組大鼠在曠場實驗中活動時間及站立次數(shù)均明顯低于**模型組(P＜0.01,P＜0.05),曠場中央格停留時間也比模型組低,表明蒙醫(yī)溫針能夠改善**所致大鼠焦慮樣行為減少和探索行為和探索行為增強(qiáng)的異常變化。通過實驗研究發(fā)現(xiàn),蒙醫(yī)溫針改善**的時間、一般情況和行為學(xué)改變的作用和***注射液的作用無差別,表明蒙醫(yī)溫針同***注射液一樣,可以改善**大鼠的行為、情緒變化,緩解大鼠的緊張程度,有**催眠的效果。
**導(dǎo)致的煩躁、倦怠等異常行為和情緒變化不僅影響到人的生活質(zhì)量,更會影響人的認(rèn)知、記憶能力。蒙醫(yī)溫針能延長**時間的同時有效調(diào)節(jié)**模型大鼠精神情緒行為的異常,提示蒙醫(yī)溫針具有改善睡眠、**、**的作用,而其**機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。