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淺析光遺傳學技術在三箱社交行為實驗中的測試方法與注意事項

1、 動物三箱社交自由探索實驗(three chamber free exploring test)

小鼠天性對新奇事物有好奇心,研究表明,與熟悉的環(huán)境相比,小鼠對不 熟悉的環(huán)境有更強探索欲望。本實驗是在一個(20+8+20) *20cm的位置偏好箱 中完成的,包含左側(cè)箱、右側(cè)箱和中間箱(自由運動時小鼠從中間箱放入,避 免人為控制的左右箱進入順序?qū)嶒灲Y果造成影響)。自由探索實驗(free exploring)以及后面將要提到的實時位置偏好實驗均是用這種三箱裝置完成, 每套三箱設備使用不同的花紋的壁紙以及不同紋路地板作為不同環(huán)境。所用到 的壁紙有四種圖案,A.黑白星形格B.斜黑白條紋C.黑白方格D.豎直黑白 條紋,本文所用到的地板有兩張,地板1.左側(cè)平板,右側(cè)淺斜條紋;地板2. 側(cè)空心圓格,右側(cè)空心條紋,將環(huán)境與地板配對使用。

環(huán)境自由探索實驗旨在評價小鼠的探索行為,研究目標腦區(qū)及環(huán)路在探索 行為中所起的作用。自由探索實驗中,所用到環(huán)境為A.黑白星形格+B.斜黑白 條紋壁紙和地板1左側(cè)平板,右側(cè)淺斜條紋,每次實驗前均需測試小鼠對三箱 環(huán)境偏好的基礎值,即baseline測定。

2、主要材料和設備

材料和設備
廠商信息

行為測試箱


攝像頭 上海欣軟
攝像頭支架
采集卡 上海欣軟
SuperMaze動物行為分析軟件 上海欣軟
473nm藍光激光器 杭州紐頓

3、三箱社交探索實驗基本步驟

本文采用的自由探索行為實驗(free exploring)包括連續(xù)三天的測試。

  • 第Yi天為基線baseline檢測,每只小鼠放入中央箱之后開始自由探索,每 只小鼠探索時間為20min,軟件將自動記錄小鼠運動軌跡、平均速度以及在各 箱所停留的時間進入次數(shù)等參數(shù),將其記為baselineo

  • 第er天為training階段,用中間隔板將小鼠限制于某一側(cè)環(huán)境,讓其在指 定的20*20cm單側(cè)箱內(nèi)自由探索,并同時給予473nm LED光照,刺激參數(shù) BLA/NAC均為20Hz, 15ms,光纖末端光強10mw左右。(為避免激光損輸出 傷,刺激模式為3s-on-3s-off不斷循環(huán),直到20min測試時間束。)

  • 第三天為test階段,位置偏好箱兩側(cè)均正常開放,將小鼠置于中央箱,令 其自由探索20min,并利用軟件系統(tǒng)自動記錄小鼠運動軌跡、平均速度以及在 各箱所停留的時間、進入次數(shù)等參數(shù),將其記為Test

(環(huán)境探索實驗使用的三箱環(huán)境為A.黑白星形格+ B.斜黑白條紋壁紙和地 板1左側(cè)平板,右側(cè)淺斜條紋。由于第er天training階段在指定封閉環(huán)境中給 光刺激20min,在第三天test時,與非刺激環(huán)境相比,該光刺激環(huán)境對于小鼠 而言是熟悉的環(huán)境(familiar),因此由于對不熟悉環(huán)境的探索天性,小鼠在 test階段理論上將對非光照的不熟悉環(huán)境表現(xiàn)出更強的偏好性。) 



4、注意事項

(I) .為避免激光損傷,藍色激光刺激模式為間歇給光。

(II) .每次實驗前,小鼠先放入彳丁為學室適應半小時以上。

(III) .每只小鼠實驗結束后,應用75%酒精徹底清潔實驗箱,避免小鼠行為結果 受到上一只小鼠的氣味影響。



滬公網(wǎng)安備 31011202007432號

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